DNA测序服务-测序服务-PCR测序

Sanger法测序的原理
利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物,直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止,终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

测序时间
质粒/纯化后的PCR产物：1.5天
菌液/PCR产物:2天
TA克隆测序:3-4天

测序仪器：3730XL
快速电泳,3小时左右即可达到测序要求
新型液体分离胶使读序长度达1100bp，精确读序达800bp。
新型碱基识别与质量评分软件，提高测序准确性。
电泳温度可达70度，有助于去除二级结构的影响。
高灵敏度提高了测序模板DNA的浓度适应范围。
良好的温控装置保证片段分析准确性及重现性良好。
毛细管内荧光检测，灵敏度高。
双光束双侧激光激发，荧光信号强度高度均一。

测序样品的要求：
1.未纯化的PCR原液
片断通常大于200bp；
提供浓度大于50ng/ul，体积大于50ul；
2ul电泳检测条带清晰无杂带。　
2.已纯化的PCR
PCR产物溶于超纯水中；
浓度大于50ng/ul，体积大于20ul；
电泳检测条带单一。
3.质粒要求
质粒浓度大于100ng/ul，体积大于20ul；
建议使用相关试剂盒提取；
建议同时提供1ml菌液；
大质粒需要注明载体长度。
4.菌液模板要求
说明载体的抗性，我们提供Amp 、kan、chl、tet四种抗生素,Zeocin抗性需要客户提供；
对于低拷贝质粒请直接提供1ug纯化质粒；
提供200ul-1ml左右的过夜培养菌液，加15%灭菌甘油，于离心管中封口保存，防止交叉污染或泄漏；
建议尽量提供穿刺培养的菌种。
5.引物要求
浓度>5pmol/ul，体积大于20ul；
随机引物和兼并引物不适合测序；
尽可能提供引物全序列，PCR退火温度；
T7、SP6、M13(+)、M13(-)、T3等通用引物我们免费提供。

测序价格：35.00/反应。

测序订单

测序引物与载体

TA克隆测序

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